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通用型基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）

版號：TQ 201909001

【產(chǎn)品概述】

本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA 的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，用于提取血液、唾液、口腔拭子、動物組織、糞便、飼料中的基因組DNA。可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、熒光定量PCR，文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。

【試劑盒組成】

【適用范圍】 血液、唾液、口腔或環(huán)境拭子、動物組織、糞便、飼料等樣品。

【注意事項(xiàng)】

請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

1.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA/RNA片段較小且提取量也下降。

2.若無特別說明，所有離心步驟均在室溫完成。

【操作步驟】

使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。

1  樣本前處理

1.1 血液

a. 取200 μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，

b. 加入20 μl Proteinase K溶液

c. 加入200 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

d. 加人200 μl 無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

1.2 組織

a. 切取30-50 mg 動物組織樣品，加入準(zhǔn)備好的 2.0ml 離心管，樣品應(yīng)盡量破碎，便于后續(xù)消化；

b. 加入20 μl Proteinase K溶液和200 μl緩沖液GA ，渦旋振蕩混勻，于恒溫水浴鍋 65 ℃水浴30 min，期間每隔 3-5 min 渦旋混勻或者置于水浴振蕩儀中消化（如組織塊未消化*，應(yīng)延長水浴時(shí)間至組織塊消失），簡短離心以收集附著在管壁及管蓋的液體。

c. 加入200 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

d. 加人200 μl 無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

1.3 拭子

a. 如果是干拭子樣本直接加入500 μl緩沖液GA；如果是含有唾液保存液的拭子樣本，拿到樣品管后混勻，12000 rpm離心3 min，去上清保留100 μl的體積，再加入500 μl緩沖液GA。

b. 加入20 μl Proteinase K溶液，渦旋10 sec混勻，65℃放置30 min，每隔10 min渦旋混勻數(shù)次。然后吸取400 μl上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

c. 加入等體積400 μl緩沖液GB，65℃放置15 min，每隔5min渦旋混勻數(shù)次。

d. 加入400 μl無水乙醇，充分顛倒混勻。

1.4 唾液

a. 按照要求取出200 μl唾液樣本，加入等體積200 μl緩沖液GA

b. 加入20 μl Proteinase K溶液，顛倒混勻，65℃放置30 min，每隔10 min渦旋混勻數(shù)次。

c. 加入等體積400 μl緩沖液GB，65℃放置15 min，每隔5min渦旋混勻數(shù)次。

d. 加入400 μl無水乙醇，充分顛倒混勻。

1.5 糞便

a. 稱取糞便樣本150 mg-300 mg 至 2.0ml 離心管，加入800 μl緩沖液GA，渦旋1min，65℃水浴10 min，期間顛倒混勻幾次。

b. 水浴后12,000 rpm(約13,400×g) 離心3min，取300 μl 上清至新的2 ml 離心管中。

c. 注意：(選做) 若后續(xù)實(shí)驗(yàn)對 RNA 敏感，可加入RNase A 溶液去除RNA。

d. 加入20 μl Proteinase K，振蕩混勻，再加入300 μl 緩沖液 GB，渦旋振蕩混勻，65 ℃水浴放置15 min，期間每隔3-5 min 振蕩混勻。

e. 簡短離心后加入300 μl 無水乙醇，顛倒數(shù)次混勻。

*注意：加入無水乙醇后可能會出現(xiàn)渾濁，但不影響DNA 提取。

1.6 飼料

a. 切取30-50 mg 飼料樣品，加入準(zhǔn)備好的 2.0 ml 離心管，加入20 μl Proteinase K溶液和500 μl緩沖液GA ，渦旋振蕩混勻，于恒溫水浴鍋 65 ℃水浴30 min，期間每隔 3-5 min 渦旋混勻或者置于水浴振蕩儀中消化（如遇到比較干的飼料樣本，可適當(dāng)延長裂解時(shí)間）。

b. 12,000 rpm(約13,400×g) 離心3min，取300 μl 上清至新的2 ml 離心管中。

c. 加入300 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

d. 加人300 μl 無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

2 吸附

a. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放回收集管中。

3 漂洗

a. 向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD （使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。

b. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。

c. 重復(fù)操作步驟b。

d. 將吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

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